不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營(yíng)養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會(huì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營(yíng)養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)。
不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營(yíng)養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會(huì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營(yíng)養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)。
不需要，珠海愷瑞開(kāi)發(fā)的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基系列均不需要提前預(yù)熱，4℃冰箱中取出即可直接使用，不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害導(dǎo)致大面積死亡。
珠海愷瑞開(kāi)發(fā)的無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)液采用自主研發(fā)配方，且不含抗結(jié)團(tuán)劑及其它蛋白添加因子，所提供的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境與其它品牌產(chǎn)品明顯不同，因此在更換培養(yǎng)液時(shí)細(xì)胞容易出現(xiàn)短暫的不適應(yīng)現(xiàn)象。用戶(hù)在更換使用珠海愷瑞培養(yǎng)液時(shí)若出現(xiàn)上述現(xiàn)象，可將新、舊培養(yǎng)液混合后使用并逐步減低原來(lái)培養(yǎng)液體積比例，待細(xì)胞完全過(guò)渡到新培養(yǎng)液后，讓細(xì)胞在新的培養(yǎng)液中持續(xù)傳代數(shù)周時(shí)間，等細(xì)胞的生長(zhǎng)速度及密度恢復(fù)至正常狀態(tài)再做下一步的實(shí)驗(yàn)。在此期間，我們會(huì)安排技術(shù)人員及時(shí)解答用戶(hù)所遇到的問(wèn)題，確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)需要注意選擇細(xì)胞的傳代接種密度、傳代時(shí)機(jī)以及密切關(guān)注細(xì)胞活率等事項(xiàng)。以珠海愷瑞馴化篩選的HEK293為例，此細(xì)胞生長(zhǎng)周期為9~10天，傳代時(shí)細(xì)胞接種密度為0.3~0.5×106個(gè)/毫升，細(xì)胞傳代最佳時(shí)期是細(xì)胞正處于指數(shù)增長(zhǎng)期，此時(shí)細(xì)胞活率應(yīng)在98%以上，細(xì)胞密度為4~6×106個(gè)/毫升（即培養(yǎng)三到四天進(jìn)行傳代）。傳代培養(yǎng)過(guò)程中要密切注意細(xì)胞的活率狀態(tài)，若活率下降，需先檢查各個(gè)培養(yǎng)條件是否發(fā)生了變化，若無(wú)，則對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理，在小體積搖瓶中傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
進(jìn)行細(xì)胞種子保存時(shí)，請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)中推薦的細(xì)胞凍存密度將細(xì)胞離心，再加入珠海愷瑞自主研發(fā)的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)不需要對(duì)融化后的細(xì)胞進(jìn)行離心除去細(xì)胞凍存液這一步操作，直接將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小體積搖瓶進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，待細(xì)胞恢復(fù)三至四天后進(jìn)行傳代，細(xì)胞活率恢復(fù)后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，避免造成對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。
因?yàn)椴煌瑏?lái)源的腺病毒的MOI值不同，所以在正式實(shí)驗(yàn)前，可進(jìn)行最佳MOI值的摸索，設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定細(xì)胞中加入的病毒數(shù)（MOI值的摸索可參照珠海愷瑞《腺病毒擴(kuò)增系統(tǒng)操作指南》）
病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后的收樣時(shí)間因細(xì)胞來(lái)源不同而略有差異。經(jīng)多次用珠海愷瑞所優(yōu)化的HEK293細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)試，病毒的感染時(shí)間為48h所產(chǎn)生的腺病毒滴度最高，過(guò)長(zhǎng)的感染時(shí)間會(huì)導(dǎo)致滴度降低。
通常情況下細(xì)胞轉(zhuǎn)染之后活率不會(huì)有太大的降低，若出現(xiàn)細(xì)胞活率急劇下降，首先檢查培養(yǎng)條件是否有誤，其次需檢查所使用的轉(zhuǎn)染試劑量是否過(guò)量，過(guò)量的轉(zhuǎn)染試劑或者轉(zhuǎn)染復(fù)合物都會(huì)導(dǎo)致活率下降。
經(jīng)多次驗(yàn)證，使用珠海愷瑞的293細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，其最佳收樣時(shí)間為轉(zhuǎn)染后的第六天，但由于用戶(hù)表達(dá)的蛋白大小及性質(zhì)不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染后存活時(shí)間長(zhǎng)短不一，因此收樣時(shí)間應(yīng)視情況而定，建議收樣時(shí)細(xì)胞活率不要低于70%。
不需要，珠海愷瑞開(kāi)發(fā)的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基系列均不需要提前預(yù)熱，4℃冰箱中取出即可直接使用，不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害導(dǎo)致大面積死亡。
不可以進(jìn)行紫外照射，在紫外照射下，部分營(yíng)養(yǎng)添加劑/細(xì)胞因子中蛋白成分會(huì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變，降低使用效果或?qū)?xì)胞產(chǎn)生毒性；培養(yǎng)基經(jīng)紫外線照射，其中營(yíng)養(yǎng)成分可能發(fā)生改變，如某些氨基酸發(fā)生化學(xué)活化，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)。
珠海愷瑞開(kāi)發(fā)的無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)液采用自主研發(fā)配方，且不含抗結(jié)團(tuán)劑及其它添加因子，所提供的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境與其它產(chǎn)品明顯不同，因此在更換培養(yǎng)液時(shí)細(xì)胞容易出現(xiàn)短暫的不適應(yīng)現(xiàn)象。用戶(hù)在更換培養(yǎng)液時(shí)若出現(xiàn)細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，可在培養(yǎng)液中添加適量抗結(jié)團(tuán)劑（如硫酸葡聚糖）以消除細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象。若出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)速度減緩等其它現(xiàn)象，可將新、舊培養(yǎng)液混合使用并逐步減低原來(lái)培養(yǎng)液體積比例，待完全過(guò)渡到新培養(yǎng)液后，讓細(xì)胞在新的培養(yǎng)液中持續(xù)傳代數(shù)周時(shí)間以后再進(jìn)行蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)。在此期間，我們會(huì)安排技術(shù)人員及時(shí)解答用戶(hù)所遇到的問(wèn)題，確保細(xì)胞培養(yǎng)的成功。
以珠海愷瑞馴化篩選的CHO-K1為例，該細(xì)胞生長(zhǎng)周期為9~10天，傳代時(shí)，細(xì)胞接種密度為0.3×106個(gè)/毫升，細(xì)胞傳代最佳時(shí)機(jī)是細(xì)胞正處于指數(shù)增長(zhǎng)期，此時(shí)細(xì)胞活率應(yīng)在98%以上，細(xì)胞密度在4~6×106個(gè)/毫升（即培養(yǎng)三到四天進(jìn)行傳代）。
傳代培養(yǎng)過(guò)程中要密切注意細(xì)胞的活率狀態(tài)，若活率下降，需先檢查各個(gè)培養(yǎng)條件是否發(fā)生了變化，若無(wú)，則對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理，在小規(guī)格搖瓶中傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
進(jìn)行細(xì)胞種子保存時(shí)，請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)中推薦的細(xì)胞凍存密度將細(xì)胞離心，再加入珠海愷瑞自主研發(fā)的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，而后依次放置于-80℃冰箱和液氮罐保存。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)不需要對(duì)融化后的細(xì)胞進(jìn)行離心除去細(xì)胞凍存液這一步操作，直接將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小規(guī)格搖瓶進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，待細(xì)胞恢復(fù)三至四天后進(jìn)行傳代，細(xì)胞活率恢復(fù)后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，避免造成對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。
因本系統(tǒng)使用的方法為高細(xì)胞密度轉(zhuǎn)染，在20×106個(gè)/ml密度條件下培養(yǎng)可能會(huì)出現(xiàn)輕微掛壁情況，這屬于正常情況，可繼續(xù)進(jìn)行下一步操作。
若轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)松散的細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，可能是細(xì)胞成團(tuán)粘附于瓶壁上并在震動(dòng)中脫落下來(lái)所致，這種情況多數(shù)是搖瓶本身不干凈或細(xì)胞存活率低而引起。在轉(zhuǎn)染后，若轉(zhuǎn)染后細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象比較嚴(yán)重，可在轉(zhuǎn)染1天后加入適量抗結(jié)團(tuán)劑（例如25mg/L左右的硫酸葡聚糖），以緩解或消除細(xì)胞結(jié)團(tuán)。
多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第7天左右可達(dá)到最高值，通常收樣時(shí)間可選擇在轉(zhuǎn)染后的第6-7天，具體收樣時(shí)間可根據(jù)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞活率來(lái)確定，一般建議在細(xì)胞活率大于70%時(shí)收樣。
雜交瘤細(xì)胞一般可以直接從靜置培養(yǎng)轉(zhuǎn)換到搖瓶懸浮震蕩培養(yǎng)，在此過(guò)程中細(xì)胞需要先通過(guò)靜置培養(yǎng)逐級(jí)擴(kuò)增，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量較多時(shí)再進(jìn)行懸浮震蕩培養(yǎng)。細(xì)胞接種到搖瓶時(shí)請(qǐng)將培養(yǎng)液切換成KD-Hybri，此時(shí)培養(yǎng)基血清含量可降至2%。
進(jìn)行無(wú)血清馴化時(shí)必須保證細(xì)胞狀態(tài)良好，細(xì)胞活率在85%以上時(shí)方可進(jìn)行。切換成無(wú)血清培養(yǎng)后細(xì)胞一開(kāi)始活率下降是細(xì)胞正在適應(yīng)無(wú)血清環(huán)境的正?，F(xiàn)象，此時(shí)需重點(diǎn)監(jiān)測(cè)細(xì)胞后續(xù)是否有增殖、活率是否在逐漸回升。若細(xì)胞活率低于50%應(yīng)補(bǔ)回2%血清，傳代2-3代，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后再進(jìn)行無(wú)血清馴化。
雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定性較差，無(wú)血清持續(xù)馴化過(guò)程中可能會(huì)引起陽(yáng)性細(xì)胞丟失，若遇到這種情況可通過(guò)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多次單克隆以提高其陽(yáng)性特性。
細(xì)胞傳代要及時(shí)并選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行傳代。不同克隆的雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速率不同，對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)系統(tǒng)適應(yīng)能力不同，最高生長(zhǎng)密度也會(huì)有不同。
