雜交瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)馴化

發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 瀏覽次數(shù)：3

雜交瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)馴化

KD-Hybri-Kit

珠海愷瑞生物

KD-Hybri-Kit為雜交瘤細(xì)胞高密度懸浮無(wú)血清培養(yǎng)系統(tǒng)，可用于雜交瘤單抗搖瓶或生物反應(yīng)器生產(chǎn)。該系統(tǒng)不僅能大幅度提高抗體表達(dá)效率，還能徹底避免單抗制備過(guò)程中血清或其他動(dòng)物來(lái)源成分的污染風(fēng)險(xiǎn)。

在進(jìn)行雜交瘤的無(wú)血清高密度懸浮培養(yǎng)之前，多數(shù)細(xì)胞往往需要進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)條件的馴化，此過(guò)程可通過(guò)使用KD-Hybri培養(yǎng)液將培養(yǎng)在KTM2培養(yǎng)液中的細(xì)胞逐步降血清培養(yǎng)來(lái)完成。KTM2是化學(xué)限定無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)液，可用于小鼠雜交瘤細(xì)胞制備中的前期融合、篩選以及雜交瘤細(xì)胞在孔板和方瓶中的擴(kuò)增培養(yǎng)。

馴

化

過(guò)

程

1. 經(jīng)過(guò)ELISA檢測(cè)與細(xì)胞單克隆，所篩選的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)增至含5%FBS血清KTM2或其它培養(yǎng)液的T75方瓶中靜置培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞活率及密度；

2. 細(xì)胞經(jīng)過(guò)一周三次換液的靜置培養(yǎng)，細(xì)胞匯合度達(dá)到80%以上時(shí)，將方瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液置換成含5%FBS的KD-Hybri培養(yǎng)液培養(yǎng)一代，目的是讓細(xì)胞提前適應(yīng)在KD-Hybri培養(yǎng)液里擴(kuò)增；

3. 隨后將方瓶中約90%細(xì)胞轉(zhuǎn)移至250ml搖瓶進(jìn)行逐級(jí)降血清懸浮培養(yǎng)（培養(yǎng)體積為搖瓶容積的1/5）。補(bǔ)充含5%FBS新鮮的KTM2培養(yǎng)液于方瓶中繼續(xù)培養(yǎng)剩余約10%細(xì)胞，用于細(xì)胞保種；

4. 搖瓶逐級(jí)降血清的過(guò)程一般為5%FBS→2.5%FBS→無(wú)血清。從5%FBS降至2.5%FBS血清時(shí)，吸走25mL培養(yǎng)液及細(xì)胞，補(bǔ)充25mL不含血清的新鮮KD-Hybri培養(yǎng)液，使血清濃度降為原來(lái)的一半；

5. 完成2.5%FBS培養(yǎng)后，將細(xì)胞全部轉(zhuǎn)移至50ml離心管，1000rpm離心5min，再用新鮮KD-Hybri培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞稀釋至1.0×10^6個(gè)/ml，接種至250ml搖瓶中進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)；

6. 完成馴化無(wú)血清培養(yǎng)后，選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（1.5-3.5×10^6個(gè)/ml）的細(xì)胞進(jìn)行傳代，以密度為0.5×10^6個(gè)/ml接種，每隔三天傳代一次。

@XEGUB}TX5OAP2PGK%@0LG6.png