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發(fā)布時間:2020-11-27 瀏覽次數(shù):1
CHO細胞高密度瞬時轉(zhuǎn)染
Hi-KDCHO-K(K03205K)為珠海愷瑞自主開發(fā)的重組蛋白CHO細胞超高密度瞬轉(zhuǎn)表達系統(tǒng),與珠海愷瑞從CHO-K1細胞中所篩選馴化的CHOK1-Hi細胞配合使用可較大幅度提高重組蛋白的CHO細胞表達量。
該系統(tǒng)包括CHO細胞超高密度培養(yǎng)液、轉(zhuǎn)染試劑、蛋白表達增強劑以及植物蛋白胨營養(yǎng)添加劑。
瞬時轉(zhuǎn)染
1.將處于對數(shù)生長期的CHOK1-Hi細胞離心重懸至20×10^6個/ml的密度,震
蕩培養(yǎng)1小時后從培養(yǎng)箱中取出進行轉(zhuǎn)染;
2.轉(zhuǎn)染時直接添加質(zhì)粒至細胞培養(yǎng)中(按終濃度17ug/ml計算),充分搖勻
后,再添加轉(zhuǎn)染試劑(TA-CHO)(添加量按終濃度35ug/ml計算),充分混勻
后將其放回培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng);
3.在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5小時后,以體積為2:1的比例(2份Hi- KDCHO,1份轉(zhuǎn)染
細胞懸液)用Hi-KDCHO培養(yǎng)液將轉(zhuǎn)染后的細胞稀釋后,放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
產(chǎn)物表達與檢測
1.轉(zhuǎn)染24小時后加入細胞蛋白表達增強劑KE-CHO和營養(yǎng)補充劑KT-Feed,以
增加產(chǎn)物表達量;
2.待轉(zhuǎn)染后的細胞生長至10×10^6個/ml時(一般為接種后的1~2天),需每
天添加1g/L的葡萄糖,若細胞生長至20×10^6個/ml時(一般為接種后的4~6
天),葡萄糖的添加量可加倍;
3.轉(zhuǎn)染后第5-7天測定產(chǎn)物表達量,客戶可根據(jù)細胞狀態(tài)及表達量選擇適宜的收
獲時間。
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